產(chǎn)品信息 二、HRM專(zhuān)用熒光染料 —— LyGreen 高分辨率熔解曲線(xiàn)(high-resolution melting,HRM)是一種基于單核苷酸熔解溫度不同而形成不同形態(tài)熔解曲線(xiàn)的基因分析新技術(shù),具有*的敏感性,可以檢測出單個(gè)堿基的差異,并且成本低、通量高、速度快、結果準確、不受檢測位點(diǎn)的局限,實(shí)現了真正的閉管操作。在突變掃描、單核苷酸多態(tài)性分析、甲基化研究、基因分型、序列匹配等方面HRM分析技術(shù)發(fā)揮著(zhù)重要作用。 HRM分析的一個(gè)必要條件是飽和染料,勝任這一任務(wù)的染料僅有:LC Green,SYTO 9, LyGreen等幾個(gè)產(chǎn)品。 LyGreen™飽和核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結合飽和熒光染料,是新一代用于HRM分析的熒光染料,也可用于實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)。該染料結構上由兩個(gè)單體染料分子通過(guò)一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體,在沒(méi)有dsDNA存在時(shí),該結構呈無(wú)熒光環(huán)狀結構,一旦有dsDNA出現,則恢復隨機形態(tài)并與dsDNA結合發(fā)出強烈的綠色熒光。 與其他熒光染料如SYBR Green I 相比,LyGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn): 1)高靈敏度:在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強的信號。 2)準確:飽和結合雙鏈DNA全部小溝位置,變形時(shí)染料不遷移,熒光信號準確反映雙鏈DNA變化情況;過(guò)量染料形成二聚體,而不游離,使得LyGreen對PCR的抑制遠小于SYBR Green I,因此,使用LyGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗可以使用快速PCR步驟。 3)高穩定性:在正常的儲存、操作和PCR過(guò)程中不會(huì )被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲存在室溫或冰箱里,也可以反復凍融。 4)安全性好:細胞膜穿透性測試表明,LyGreen幾乎不能穿透細胞膜,安全性高。 5)兼容性:和SYBR Green I 光譜相似,使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設置,也無(wú)需改變操作步驟,qPCR完成后,無(wú)需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統下觀(guān)察分析。 6)重復性好(如圖2.):特殊設計染料,相同反應體系下,熒光信號釋放僅與雙鏈濃度有關(guān),線(xiàn)性。 圖2.: LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析. HRM分析設備為L(cháng)ightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)
產(chǎn)品信息 三、PikoGreen——一種極為靈敏的雙鏈DNA定量熒光染料。 對微量的雙鏈 DNA 進(jìn)行定量在各種生物學(xué)應用中都顯得非常重要,例如 cDNA 文庫的構建;用于亞克隆的 DNA 片段的純化;定量 DNA 擴增產(chǎn)物,在藥物中DNA 分子殘留的測定等 。 Picogreen染料是一種dsDNA定量熒光染料,基本不受ssDNA和RNA的影響,并且可以耐受一定濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白等干擾。目前使用Picogreen染料定量檢測DNA已經(jīng)廣泛用于生物學(xué)檢測,并被2010年版《中華人民共和國藥典》選為藥物殘留DNA定量方法。但是價(jià)格貴,貨期長(cháng),假貨魚(yú)目混珠等在市場(chǎng)上普遍存在。 PikoGreen是李記生物自主研發(fā)的一款新型dsDNA定量熒光染料,其檢測靈敏度高,可檢測到pg級DNA;檢測范圍寬,可跨越4個(gè)數量級;特異性好。在低檢測限,穩定性等方面全面超越PicoGreen, 是PicoGreen的替代產(chǎn)品,價(jià)格僅為PicoGreen的1/2. PikoGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn): 1)靈敏:數量級較UV吸光讀數更敏感,可節省樣品; 2)特異性強:只結合dsDNA,特異性強,不受樣品常規污染影響。傳統紫外吸光法容易受樣品中存在的單鏈DNA,蛋白,RNA等影響; 3)耐受性好:耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖,可以直接定量PCR擴增產(chǎn)物而無(wú)需從反應混合物中純化DNA。 4)線(xiàn)性范圍寬:PikoGreen dsDNA染料測定DNA濃度,在100pg/ml-100ng/ml范圍內呈良好線(xiàn)性;熒光計兼容。 5)容易使用:在樣品中加入染料,等待5-6分鐘染色,然后讀數即可,且適用于96和384孔板;與大多數基于熒光的酶標儀和可適用于各種DNA樣品分析,PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。 6)PikoGreen dsDNA檢測dsDNA的線(xiàn)性關(guān)系良好!(見(jiàn)圖3、圖4、圖5) 圖 3.PikoGreen Broad Range dsDNA (Ex/Em 350/460nm)檢測不同類(lèi)型dsDNA,表現出良好線(xiàn)性關(guān)系。 圖 4.分別使用PikoGreen Broad Range dsDNA 和Quant-iT檢測calf thymus DNA,顯示 PikoGreen dsDNA 測得的 DNA 樣本線(xiàn)性關(guān)系更好,且動(dòng)態(tài)測量范圍更廣 圖5. 用PikoGreen Broad Range dsDNA梯度標準calf thymus DNA溶液所做的線(xiàn)性回歸分析。 產(chǎn)品信息